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    如何正確處理植物組織樣本

    發(fā)布時(shí)間: 2018-06-26  點(diǎn)擊次數(shù): 1484次

    一、勻漿介質(zhì)
    一般采用0.05mol/LTris-HCl,pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶(hù)可根據(jù)樣本及測(cè)定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。
    二、組織勻漿的制備
    1、取組織塊(0.2g~0.5g)zui少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱(chēng)重,放入5ml的勻漿管中。
    2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例加入4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。
    3、勻漿的方式:手工勻漿,機(jī)器勻漿。
    ①手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充分研碎,制成20%的勻漿液。
    ②機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī)10000~15000轉(zhuǎn)/分上下研磨制成20%組織勻漿,也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(勻漿時(shí)間10秒/次,間隙30秒,連續(xù)3~5次,在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延長(zhǎng)勻漿時(shí)間)。
    鏡檢觀(guān)察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片、染色均可以),顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞是否破碎,若沒(méi)有則可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。
    4、將制備好的20%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進(jìn)行測(cè)定。
    三、樣本保存
    植物組織樣本暫時(shí)不測(cè)定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。
    制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定,如放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)相關(guān)酶活會(huì)有所下降,部分指標(biāo)4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測(cè)定可存5~7天等)

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