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HA標簽系統(tǒng)利用一個HA (流感病du血凝素,influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標蛋白。HA標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端,該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細胞類型,相應(yīng)的HA標簽抗體也被廣泛應(yīng)用。HA標簽抗體能特異識別C末端或N末端帶有HA標簽(HA-tagged)的融合蛋白,也可以用于檢測和HA tag融合表達蛋白的表達、細胞內(nèi)ding位,以及純化、定性或定量檢測HA tag融合表達蛋白等。
我們在選擇一個標簽抗體時,主要根據(jù)自己實驗應(yīng)用上的需要。這里需要考慮的因素包括,HA抗體的應(yīng)用檢測類型、HA抗體的克隆性及制備來源等。比如該HA抗體是否能用于免疫熒光IF的檢測?是否可以用于Western Bloting和免疫沉淀IP實驗?是否需要HRP偶聯(lián)的單克隆HA標簽抗體?還是一個兔來源的HA多抗更合適?
一般來說,應(yīng)用類型越多,在使用過程中的選擇余地就越大,而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性都要優(yōu)于多克隆抗體,而多克隆。另外,抗體的效價也是考察該抗體性價比的重要方面,也即相當于實際應(yīng)用時的稀釋比率。一個效價高的100μl HA抗體(假如其WB檢測的稀釋比率是1:5000,終使用液相當于500ml),要比效價低的1ml的HA抗體(假如WB檢測的稀釋比率是 1:200,終使用液相當于200ml)性價比更高。因此在選擇抗體的時候,不但需要考慮抗體的量,還需要考慮抗體的效價,即不同應(yīng)用的建議稀釋比率。