ELISA 檢測試劑盒試驗原理：

RANTES/CCL5試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知RANTES/CCL5濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將RANTES/CCL5和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中RANTES/CCL5的濃度呈比例關(guān)系。

ELISA 檢測試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

• 蒸餾水。
• 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
• 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

• 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
• 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
• 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項

• 試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
• 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
• 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
• 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
• 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
• 洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
• 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
• 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
• 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

ELISA 檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法

• 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
• 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
• 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
• 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
• 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。