人 (Human) 血小板活化因子乙酰水解酶 (PAFA) ELISA 檢測(cè)試劑盒 本試劑僅供研究使用 標(biāo)本:血清或血漿 試驗(yàn)原理: PAFA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知PAFA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將PAFA和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PAFA的濃度呈比例關(guān)系。 試劑盒內(nèi)容及其配制 試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制 96/48人份酶標(biāo)板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型 塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型 標(biāo)準(zhǔn)品:1600U/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀 空白對(duì)照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型 生物素標(biāo)記的抗PAFA抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型 洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 標(biāo)本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型 自備材料 蒸餾水。 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 振蕩器及磁力攪拌器等。 安全性 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。 操作注意事項(xiàng) 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。 樣品收集、處理及保存方法 血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 試劑的準(zhǔn)備 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行: 1600 U/L (6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 800 U/L (5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 400 U/L (4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 200 U/L (3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 100 U/L (2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50 U/L (1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 0 U/L (空白對(duì)照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 洗滌緩沖液(50×)的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。 人 (Human) 血小板活化因子乙酰水解酶 (PAFA) ELISA 檢測(cè)試劑盒操作步驟 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
建議使用的實(shí)驗(yàn)方案 標(biāo)準(zhǔn)品濃度(U/L) A 1600 1600 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 B 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 C 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 D 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 E 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 F 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 局限 6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線(xiàn)性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)無(wú)法得到的結(jié)果。
試劑盒性能 1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線(xiàn)性。樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。 2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。 3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。 人 (Human) 血小板活化因子乙酰水解酶 (PAFA) ELISA 檢測(cè)試劑盒結(jié)果判斷與分析 1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值 2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的PAFA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線(xiàn),樣品的PAFA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)換算出相應(yīng)的濃度。 3、檢測(cè)值范圍:0-1600U/L 4、敏感度: 1.0 U/L A02242 大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat soluble Toll-like receptor 2,sTLR-2 ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02243 大鼠前列腺素F2α(PGF2α)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Prostaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02244 大鼠白三烯E4(LTE4)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat leukotriene E4,LT-E4 ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02245 大鼠尿激酶(UK)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat urokinase,UK ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02246 大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat coagulation factor Ⅻ,FⅫ ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02247 大鼠凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat coagulation factor ⅩⅢ,FⅩⅢ ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02248 大鼠凝血因子Ⅲ(FⅢ)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat coagulation factor Ⅲ,FⅢ ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02249 大鼠載脂蛋白H(Apo-H)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Apolipoprotein H,Apo-H ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02250 大鼠白介素2受體(IL-2R)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02251 大鼠腎上腺髓質(zhì)素(ADM)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat adrenomedullin,ADM ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02252 大鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Beta-Endorphin receptor,β-EPR ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02253 大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)性蛋白激酶2(CAMK 2)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat calcium/calmodulin-dependent protein kinase-Ⅱ,CAMK 2 ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02254 大鼠肝脂酶(HL)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat hepatic lipase,HL ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02255 大鼠煙堿型乙酰膽堿受體(N-AChR)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat nicotinic acetylcholine receptor,N-AChR ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02256 大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat muscarinic acetylcholine receptor,M-AChR ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02257 大鼠活化蛋白C(APC)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat activated protein C,APC ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02258 大鼠甘丙肽/甘丙素(GAL)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat galanin,GAL ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02259 大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat α-Glucosidase,a-Glu ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02260 大鼠破骨細(xì)胞分化因子(ODF)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat osteoclast differentiation factor,ODF ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02261 大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Toll-like receptor 9,TLR-9 ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02262 大鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Leptospira IgG,Lep IgG ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02263 大鼠熱休克因子1(HSF1)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02264 大鼠β羥丁酸(βOHB)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Beta-Hydroxybutyric Acid,β-OHB ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02265 大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat cytochrome P450,CYP450 ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02266 大鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02267 大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02268 大鼠溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Bromodeoxyuridine,BrdU ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02269 大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat transforming growth factorsβ2,TGFβ2 ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02270 大鼠細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat cytochrome P450 2E1,CYP2E1 ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02271 大鼠α1微球蛋白(α1-MG)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat α1-microglobulin,α1-MG ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02272 大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat monocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02273 大鼠過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat peroxisome prolifeRators activator receptors alpha,PPAR-α ELISA Kit ,人 (Human) 血小板活化因子乙酰水解酶 (PAFA) ELISA 檢測(cè)試劑盒規(guī)格: 96T/48T A02274 大鼠鈣調(diào)素(CAM)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat calmodulin,CAM ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02275 大鼠載脂蛋白E(Apo-E)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat Apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T A02276 大鼠網(wǎng)膜素(omentin)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: Rat omentin ELISA Kit ,規(guī)格: 96T/48T |