人血小板反應(yīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒僅供研究使用
發(fā)布時間: 2016/6/6 點擊次數(shù): 692次
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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 |
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使用目的: 本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血小板反應(yīng)(TSP-1)含量。 人血小板反應(yīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒僅供研究使用實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人血小板反應(yīng)(TSP-1)。用純化的人血小板反應(yīng)板反應(yīng) (TSP-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血小(TSP-1),再與 HRP標(biāo)記的血小板反應(yīng) (TSP-1)抗體 ,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 T顯色。TB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,(TSP-1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人血小板反(TSP-1)濃度。并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的血小板反應(yīng)應(yīng) 標(biāo)本要 1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過(HRP)活性。 人血小板反應(yīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒僅供研究使用操作步驟 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行釋。 240µg/L 120µg/L 60µg/L 30µg/L 15µg/L 5號標(biāo)準(zhǔn)品 4號標(biāo)準(zhǔn)品 3號標(biāo)準(zhǔn)品 2號標(biāo)準(zhǔn)品 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 150µl的 5號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 150µl的 4號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 150µl的 3號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 150µl的 2號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 溫育:用封板膜封板后 37℃溫育30分鐘。 30倍稀釋后備用 配液:將 30倍濃 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜重復(fù) 5次,拍干。30秒后棄去,如此 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。 溫育:操作同 3。 洗滌:操作同 5。 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘. 10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。 11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。 人血小板反應(yīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒僅供研究使用操作程序總: 計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 人血小板反應(yīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項 1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2.濃洗滌液可能會有析出,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響 3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉 6.底物請避光保存。 7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗 8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9.本試劑不同批號組分不得混用。 保存條件及有效期 1.試劑盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6個月 |
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